幹細胞培養施設|SCCL

研究・解析レポートResearch & Analysis Report

弊社が所有する
細胞培養上清の解析データを、
研究の基礎資料として公開しています。

報告書の概要と、
解析データの閲覧方法をご案内します。

報告書の概要

研究報告書

幹細胞培養上清由来
エクソソームの
miRNA 組成および
標的パスウェイ予測の比較

脂肪・歯髄・羊膜・臍帯血・
骨髄・胎盤由来
6 検体のデータ報告

版 ver1.06(公開前レビュー版)
作成日 2026 年 10 月 7 日
報告書署名 株式会社エス・シー・シー・ラボ/
BiOStyle Clinic Osaka
データ所有者 株式会社エス・シー・シー・ラボ
解析受託 株式会社オーダーメードメディカルリサーチ
構成 4 部 19 章と付録 A〜H。
全 92 ページと、
解析データ(Excel)・図

脂肪・歯髄・羊膜・臍帯血・骨髄・胎盤の
6 種の幹細胞培養上清から回収した
細胞外小胞(EV)の miRNA を、
次世代シーケンスで定量しました。

標的遺伝子予測、GO 解析、
パスウェイ解析により、
由来細胞ごとの miRNA 組成と
調節の特徴を評価した報告書です。

新規の実験ではなく、
既存データの整理と再解析で、
生リードからパスウェイの統計表まで
全工程の出力を保存し、
再解析ができる形にしています。

報告書の目次

報告書は 4 部 19 章と
付録 A〜H で構成されています。

第Ⅰ部 共通基盤

  • 第1章序論(背景・目的・本報告の位置づけ・規制と学会の見解)
  • 第2章試料と実験デザイン
  • 第3章解析方法
  • 第4章データ資源と出所

第Ⅱ部 目的別の解析

  • 第5章目的A:品質・同一性の評価
  • 第6章目的B:由来細胞間の組成比較
  • 第7章目的C-1:標的遺伝子と GO 解析
  • 第8章目的C-2:パスウェイ解析
  • 第9章目的D:がん関連の評価
  • 第10章目的E:二次利用と再解析のための整理

第Ⅲ部 整理パターン別の比較ビュー

  • 第11章比較ビュー 1:検体別プロファイル
  • 第12章比較ビュー 2:パスウェイカテゴリ別
  • 第13章比較ビュー 3:miRNA ファミリー別
  • 第14章比較ビュー 4:研究テーマ別
  • 第15章比較ビュー 5:検体ペアの差分

第Ⅳ部 評価

  • 第16章由来細胞間の違いの総合
  • 第17章SCCL による寸評
  • 第18章限界
  • 第19章結論と今後

付録・巻末

  • 付録 A用語解説
  • 付録 B有意パスウェイ 200 件の一覧
  • 付録 C検体特異的パスウェイ(96 件)
  • 付録 DQC 数値の全体
  • 付録 E標的候補を支える miRNA(上位 40)
  • 付録 FGO term の一覧(72 件)
  • 付録 G200 パスウェイの z スコア(6 検体)
  • 付録 Hデータの出所、構成、再現手順
  • 巻末参考文献/利益相反・免責/参照・引用時の出典表記について

解析の流れ

解析の流れ。上 2 段は委託先の工程(培養上清 6 検体から RNA 抽出、ライブラリ調製、品質確認、マッピング・定量、標的遺伝子予測、GO 解析、パスウェイ解析)、下段は本報告での再整理
図1 解析の流れ(報告書 第 3 章)

試料と解析方法

6 種の由来細胞の培養上清を各 16 mL 用い、
エクソソーム画分から
small RNA を抽出しました。

ライブラリは QIAseq miRNA UDI で調製し、
NextSeq(シングルエンド 75 bp)で
シーケンスしました。

検体 D001-AD 脂肪、D002-DP 歯髄、D003-AM 羊膜、D004-CB 臍帯血、D005-BM 骨髄、D006-PL 胎盤(各 16 mL、反復なし n=1)
small RNA 量 138〜346 ng(A260/A280 1.5〜1.8)。培養上清 1 mL あたり 8.6〜21.6 ng
ライブラリ QIAseq miRNA UDI。平均ライブラリ長 199〜203 bp、ライブラリ濃度 43.9〜79.5 nM
シーケンス NextSeq、シングルエンド 75 bp。入力リード 1,060 万〜1,491 万
マッピング・定量 CLC Genomics Workbench v25.0.1(ヒトゲノム hg38、miRBase 22)。CPM で正規化し、5 カウント以上の miRNA を後続解析に使用
標的遺伝子予測 StrandNGS 4.0、TargetScan(p≦0.05)
GO 解析 超幾何分布、Benjamini–Hochberg 補正
パスウェイ解析 PathVisioRPC 1.2、WikiPathways(2015.05.12 版)。標的遺伝子に一律の変動値 FC=2.5 を付与
本報告での再計算 Spearman 相関、Jaccard 係数、キーワード分類、がん関連の検討

数値の出所は、
A(原本ファイルから読み取り)、
B(委託先報告書から転記)、
C(本報告で再計算)の
3 区分で示しています。

主な結果

  • 01

    安定した miRNA 組成

    6 由来すべてで解析に十分なリード(1,060 万〜1,491 万)が得られ、5 カウント以上の miRNA を 225〜351 種検出しました。上位 18 miRNA が全体の 74.9〜86.3 % を占め、少数の miRNA を中心とする安定した組成でした。腫瘍抑制性として知られる let-7 ファミリーは全由来で主要な構成要素の一つで、骨髄 63.8 %、歯髄 62.5 % と特に高い割合でした。

  • 02

    由来ごとの特徴

    羊膜と臍帯血(Spearman 相関 0.96)、歯髄と骨髄(0.95)は、それぞれ近縁な組成を示しました。胎盤は C19MC 系を含む 51 種の固有 miRNA をもち、6 由来の中で最も個性的なプロファイルでした。脂肪は両グループの中間に位置します。

  • 03

    パスウェイの構成

    有意なパスウェイは由来あたり 61〜85 件で、骨髄(85 件)と胎盤(76 件)が多い結果でした。6 由来に共通する 8 経路には腫瘍抑制性 miRNA の調節経路が含まれます。経路の構成は、骨髄と歯髄で免疫関連、羊膜と臍帯血で代謝と DNA 修復・細胞周期関連、胎盤で固有の経路(24 件)が多く、由来ごとに特徴が現れました。

  • 04

    がん関連の評価

    本計測の範囲では、がん化の促進を示す所見は認められませんでした。がん遺伝子の発現上昇を示すデータは得られておらず、MYCN などのがん遺伝子は miRNA の標的候補として抑制方向の調節を受け得ると予測されました。

上位 18 miRNA の組成のヒートマップ。(a) log10 CPM、(b) miRNA ごとに標準化した log2 CPM の z 値。6 由来とも let-7a-5p、miR-423-5p、miR-320a-3p が多い
図4 上位 18 miRNA の組成
(報告書 第 6 章)
検体間の類似度。(a) 上位 18 miRNA の Spearman 相関、(b) ユークリッド距離、(c) 階層的クラスタリング。羊膜と臍帯血、歯髄と骨髄が近い
図7 検体間の類似度(報告書 第 6 章)
(a) 検体ごとの有意パスウェイ数(脂肪 62、歯髄 64、羊膜 71、臍帯血 61、骨髄 85、胎盤 76。斜線は検体特異的なもの)、(b) パスウェイ集合の Jaccard 係数
図10 有意パスウェイ数と
パスウェイ集合の Jaccard 係数
(報告書 第 8 章)

注目される経路(機能的示唆)

有意パスウェイを
機能の領域ごとに整理すると、
EV の miRNA が調節に関与し得る
生体機能として、
次の領域が浮かび上がりました
(報告書 第 8 章)。

いずれも miRNA の標的候補が
その経路に集積していることに
基づく予測です。

ゲノムの維持・DNA 修復 NIPBL による DNA 損傷応答と染色体構造の維持の経路は、6 由来すべてで有意(z=3.4〜5.6)。DNA 損傷応答と、miRNA による DNA 損傷応答の調節も 5 由来で有意。
細胞保護・恒常性 小胞体ストレス応答(脂肪)、分子シャペロン HSP70 によるアポトーシスの調節(骨髄・脂肪)、オートファジー(5 由来)が有意。
組織修復・血管 ROBO4 による血管安定化と VEGF による血管新生の調整(羊膜・臍帯血)、力学刺激による YAP/TAZ の制御(骨髄・歯髄・胎盤)、腎の発生・再生に関わる Wnt シグナル(胎盤・臍帯血・羊膜)が有意。
免疫調節 IL-26 による炎症応答の調節(骨髄・歯髄)と、VIP による免疫寛容の制御(歯髄・骨髄)が有意。骨髄と歯髄の EV が、免疫の調節に関わる経路に特徴をもつ。
代謝・抗酸化 コレステロール生合成は 6 由来すべてで有意。老化応答に伴う NAD 代謝(臍帯血・脂肪・胎盤)と、抗酸化を支えるペントースリン酸経路(胎盤・臍帯血)も有意。
新たに見いだされた経路 運動で生じる代謝物 Lac-Phe による食欲と代謝の制御(6 由来すべてで有意)、運動による概日時計の調節(歯髄)、外胚葉(皮膚・神経)の分化(臍帯血・羊膜)、PRC2 によるエピジェネティック制御(胎盤・歯髄)など、一般に注目される領域の外にある経路も有意。

由来細胞ごとの特徴

脂肪(AD) 腫瘍抑制 miRNA の調節経路が由来内で最も高い z スコア(5.9)。ほかの由来との中間的な組成で、比較の基準として扱いやすい。
歯髄(DP) let-7 ファミリーの割合が 62.5 % と高く、免疫関連の経路が最も多い(19 件)。骨髄と近縁な組成。
羊膜(AM) 検出した miRNA の種数が最も多く(351 種)、DNA 損傷・細胞周期関連の経路が多い。臍帯血と最も近い組成。
臍帯血(CB) 上位 18 種への集中度が最も高い(86.3 %)。DNA 修復・細胞周期と発生・分化関連の経路が多い。
骨髄(BM) 有意パスウェイ(85 件)と let-7 ファミリーの割合(63.8 %)がともに最も高く、免疫関連の経路も多い。調節を受ける経路の幅が最も広い。
胎盤(PL) 固有の miRNA(51 種)と固有のパスウェイ(24 件)が最も多く、胎盤に特徴的な C19MC 系 miRNA を含む。ほかの由来と最も異なるプロファイル。

データの限界

本データは、
各由来 1 検体(n=1)の解析です。

結果の解釈には、
次の限界があります
(報告書 第 18 章)。

  • 反復がないため、検体間差の統計的検定はできません。ドナー・ロット間の変動も不明です。
  • 培地のみの対照がなく、培地・血清由来の RNA の寄与を分離できません。
  • EV の粒子数・粒径・表面マーカーの特性評価データは含まれません。
  • 標的遺伝子は TargetScan による予測で、抑制の有無は実験で確認していません。
  • パスウェイの定義は WikiPathways 2015 年版です。最新版では経路の追加・改訂があります。

本データから導けるのは
「この 6 検体でどうであったか」
という記述で、
「由来細胞一般の性質」ではありません。

今後の課題

  • 同一由来の複数ロット・複数ドナーでの再現性の確認
  • 粒子数・粒径・マーカーによる EV の特性評価と、培地対照の追加
  • 上位 miRNA の定量 PCR による確認と、受容細胞での標的遺伝子の発現解析
  • 最新の経路データベースでの再解析

用語解説

miRNA 約 22 塩基の小さな RNA。標的 mRNA に結合して、遺伝子の発現を調節し得る。
エクソソーム(EV) 細胞が分泌する細胞外小胞の一群。内部に RNA・タンパク質を含む。本報告では、委託先の手順で回収した EV 画分の small RNA を指す。
CPM Counts Per Million。100 万リードあたりのカウント。シーケンスの深さの違いを補正する。
let-7 miRNA ファミリー。増殖・分化の調節や腫瘍抑制との関連が報告されている。
C19MC 19 番染色体上の miRNA クラスター(miR-515〜526 など)。胎盤で高発現することが知られる。
TargetScan miRNA の標的遺伝子を配列から予測するプログラム。予測であり、実験で確認された標的ではない。
GO(Gene Ontology) 遺伝子の機能分類。生物学的プロセス、分子機能、細胞の構成要素の 3 つ。
WikiPathways/PathVisio コミュニティで編集されるパスウェイのデータベースと、その上でデータを可視化・統計解析するソフトウェア。
z スコア パスウェイに含まれる基準適合遺伝子の偏りの指標。「有意」は、置換検定で p≦0.05 かつ z>0 を満たすこと。
Spearman 相関/Jaccard 係数 順位に基づく相関係数と、2 つの集合の共通部分÷和集合(0〜1)。検体間の類似度に使う。
n=1 各条件 1 検体。反復なし。

公開している解析データ

報告書のもとになった解析データを、
編集できる形(Excel・CSV)と
生データのまま公開しています。

生リードからの再定量、
経路解析の再計算、
他のデータとの統合など、
二次利用・再解析にお使いいただけます。

生リード FASTQ 6 ファイル(各検体シングルエンド 75 bp)
品質管理 FastQC・MultiQC のレポート(トリミング前後)、リード数の集計(Excel)
RNA・ライブラリ 各検体の RNA とライブラリの電気泳動像
PCA 解析 PCA プロット、ヒートマップ、ユークリッド距離(CSV)
GO 解析 検体ごとの GO 解析結果(Excel・PDF)
パスウェイ解析 有意パスウェイの概要と検体特異的パスウェイ(Excel・PDF)
解析レポート 委託先の解析レポート、miRNA-Seq 解析結果と FastQC の説明(PDF)

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  • 題名:幹細胞培養上清由来エクソソームの miRNA 組成および標的パスウェイ予測の比較:脂肪・歯髄・羊膜・臍帯血・骨髄・胎盤由来 6 検体のデータ報告
  • 報告書署名:株式会社エス・シー・シー・ラボ,BiOStyle Clinic Osaka
  • 版と年:ver1.06,2026 年
  • 入手元:このページ、または解析データのページの URL
  • 改変の有無:図表や数値を加工した場合は、その旨

表記の例:株式会社エス・シー・シー・ラボ,BiOStyle Clinic Osaka.幹細胞培養上清由来エクソソームの miRNA 組成および標的パスウェイ予測の比較:脂肪・歯髄・羊膜・臍帯血・骨髄・胎盤由来 6 検体のデータ報告.ver1.06,2026.(入手元 URL)

本報告書が引用している外部の文献や資料を用いるときは、本報告書ではなく原典を確認し、原典を出典として表記してください。委託先の報告書に由来する数値(本報告書で「区分 B」と示したもの)を用いるときは、本報告書を出典とし、転記値である旨を添えてください。

第 5 条(限界の併記)

本データは各由来 1 検体の解析です。引用・参照するときは、本報告書の「限界」(第 18 章)の内容を併記し、由来細胞一般の性質として断定しないでください。

第 6 条(改変)

図表や数値を加工・再集計・再解析して公表するときは、改変した旨と改変の内容を明記してください。改変したものを、当社や本報告書の署名者の成果として示さないでください。

第 7 条(成果の連絡と事前の相談)

本データを用いた論文・学会発表・製品などの成果は、差し支えない範囲で当社(info@sccl.jp)へお知らせください。本データを商用の製品やサービスに組み込む場合、または本データの再配布を伴う利用を行う場合は、事前に当社へご相談ください。

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2026 年 11 月 6 日 制定

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